Суть метода ПЦР

Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR – polymerase chain reaction) – метод получения множества копий определенных фрагментов ДНК (генов) в биологическом образце.

Сущность ПЦР как метода молекулярной биологии заключается в многократном избирательном копировании определённого гена (участка ДНК) при помощи специальных ферментов в условиях in vitro. Важной особенностью ПЦР является получение копий конкретного участка ДНК (гена), соответствующего заданным условиям. Синонимом процесса копирования ДНК является «амплификация». Репликация ДНК in vivo также может считаться амплификацией. Однако в отличие от репликации, в процессе полимеразной цепной реакции амплифицируются короткие участки ДНК (максимум 40 000 пар нуклеотидов).

Достоинства метода ПЦР
•Высокая чувствительность исследования

Чувствительность метода такова, что амплифицировать в ПЦР и выявить целевую последовательность можно даже в том случае, если она встречается однажды в образце из 105 клеток.
•Специфичность анализа

ПЦР позволяет выявлять ДНК конкретного инфекционного агента в присутствии ДНК других микроорганизмов и ДНК организма-хозяина, а также проводить генотипирование. Специфически подбирая компоненты реакции (праймеры), Вы можете одновременно выявлять ДНК близкородственных микроорганизмов.
•Универсальность метода ПЦР

Дело в том, что для ПЦР-диагностики инфекционных заболеваний, либо наследственных заболеваний человека можно использовать одно и то же оборудование, следовать универсальным процедурам подготовки образцов (проб) и постановки анализа, а также однотипные наборы реактивов.
•Экономия времени

Важное преимущество ПЦР – отсутствие стадий культуральной микробиологической работы. Подготовка образцов, проведение реакции и анализ результатов максимально облегчен и во многом автоматизирован. Благодаря этому, время получения результата может сокращаться до 4-5 часов.
•Эффективность метода ПЦР

ПЦР помогает избежать известных сложностей, возникающих при выращивании труднокультивируемых, некультивируемых или персистирующих форм микроорганизмов для диагностики латентных и хронических инфекций. Эффективен метод ПЦР и при скрининге возбудителей с высокой антигенной изменчивостью, а также внутриклеточных паразитов.
•Широта исследуемого клинического материала

В качестве образца при полимеразной цепной реакции может быть использован не только биологический материал от больного, но также и многие другие субстраты, в которых могут быть идентифицированы молекулы ДНК с высокой чувствительностью, например, вода, почва, продукты питания, микроорганизмы, смывы и многое другое.

Все перечисленные выше достоинства этого уникального метода - высокая чувствительность и специфичность, идентификация инфекционного агента и проведение генотипирования любого гена человека, высокая эффективность и экономия времени, универсальность приборной базы – позволяют широко применять сегодня метод ПЦР в клинической диагностике, медицинской практике, научных исследованиях, контроле качества и многих других областях.

Применение ПЦР

Области применения полимеразной цепной реакции как современного метода молекулярной биологии разнообразны. Во многом это обусловлено широтой материала, который можно анализировать (практически все, из чего можно выделить более-менее качественую ДНК может стать объектом исследования), а также подобранных праймеров.

Основные области применения ПЦР:

1. клиническая медицина
•диагностика инфекционных заболеваний
•диагностика наследственных заболеваний
•выявление мутаций
•генотипирование
•клеточные технологии
•создание генетических паспортов

2. экология
•мониторинг состояния окружающей среды
•анализ продуктов питания
•анализ генетически-модифицированных организмов (ГМО)

3. судебная медицина и криминалистика
•идентификация личности
•установление отцовства

4. фармакология

5. ветеринария

6. научные исследования (молекулярная биология, генетика)

Комплекс тропонинов I, T и C (cTnI) локализуется на нитях актина. Он играет ключевую роль в транспортировке внутриклеточного кальция в период взаимодействия актина с миозином, которое лежит в основе сокращений миокарда и скелетной мускулатуры.

Сердечный тропонин I (cTnI) имеет молекулярную массу 22,5 кДа. При ОИМ тропонины преимущественно в виде комплексов I-C или I-C-Т и реже в свободной форме в большом количестве высвобождаются из миокарда в кровь. Молекула человеческого cTnI имеет в N-терминальном участке дополнительные аминокислотные остатки, отсутствующие у тропонина скелетной мускулатуры. Возможность дифференцировать по этому признаку миокардиальный и скелетномышечный тропонины I делает cTnI наиболее точным маркером ОИМ.

Концентрация CTnI и CK-MB в крови значительно повышается уже через 4–6 ч после повреждения клеток миокарда. В последующий период этот показатель длительное время остается повышенным за счет продолжения выделения тропонина в кровь и его медленной деградации, несмотря на относительно короткий период полужизни cTnI и его комплексов.

Кассетный тест на тропонин I является иммунохроматографическим экспресс-методом для качественного установления повышенной концентрации cTnI в крови, ее плазме и сыворотке. Его можно использовать в комплексе с другими методами диагностики ОИМ.

 +4...+30 C

 18 месяцев

 

Наименование

Назначение

Единица измерения

Кол-во тестов в упаковке

Трансп. коробка

R-6505

"Кардио Тропо Тест"

идентификация Тропонина I (ранний маркер инфаркта миокарда) в крови

упаковка

20

50

Основные характеристики: пороговая концентрация 1 нг/мл. Чувствительность теста – 92,4%, специфичность – 97%.
Материал для исследования: цельная кровь, сыворотка, плазма.

Состав набора:
– 20 кассет;
– 20 одноразовых пластиковых пипеток;
– 1 флакон-капельница с буфером для разведения пробы (5 мл);
– инструкция по применению.

Синонимы: экспресс тест для определения тропонина.


Колоректальный рак (рак толстой и прямой кишки) – заболевание, поражающее 600 000 человек ежегодно.

Колоректальный рак занимает третье место по частоте заболеваемости среди других форм онкологических заболеваний. Как и в случае прочих форм опухолей, ранняя диагностика рака повышает эффективность терапии и процент выживаемости пациентов. Среди пациентов старше 45 лет у 10% диагностируют колоректальные полипы, из которых 1% представляют собой злокачественные новообразования.

Кровеносные сосуды на поверхности колоректальных образований (особенно тех, размер которых превышает 0,5 см) часто хрупки и легко повреждаются каловыми массами, выделяя небольшое количество крови в просвет кишки. Скрытую кровь обнаруживают и при возникновении других патологий, таких как, например, инфекционных заболеваний ЖКТ, а также язвенной болезни. Обнаружение крови в кале является более простым и доступным скрининговым методом, по сравнению, например, с колоноскопией.

Химические реакции, лежащие в основе традиционных методов диагностики скрытой крови в кале, основанные на псевдопероксидазной активности эритроцитов, чаще всего обеспечивают лишь минимальный уровень чувствительности и специфичности, недостаточный для эффективного скрининга.

Иммунологические методики диагностики скрытой крови характеризуются более высокими показателями чувствительности и специфичности и значительно более просты технологически, по сравнению с классическим гваяковым тестом.

 +4...+30 C

 18 месяцев

 

Наименование

Назначение

Единица измерения

Кол-во тестов в упаковке

Трансп. коробка

R-5182

"FOB Тест"

идентификация скрытой крови в фекалиях

упаковка

20

40

Основные характеристики: чувствительность теста 38–57%, специфичность 91–94% в зависимости от используемого клинического критерия и типа референс-теста (см. инструкцию).
Материал для исследования: фекалии.

Состав набора:
– 20 кассет;
– 20 пластиковых одноразовых пробирок-пробоотборников в пластиковом штативе, содержащих по 2 мл раствора для экстракции пробы;
– инструкция по применению.